增强RNA递送：NeoLNP™转染试剂的实用见解

这篇论文主要探讨了NeoLNPTM RNA转染试剂在RNA递送中的应用，特别是在COVID-19疫苗成功后，RNA为基础的治疗方法的快速发展背景下。研究的重点是通过系统地评估影响转染效率的各种参数，优化RNA递送机制。以下是论文的主要内容和结构：

1. 引言

论文首先介绍了RNA技术在疫苗开发、蛋白质替代疗法和细胞治疗应用中的潜力。RNA作为治疗剂的应用面临两个主要挑战：RNA序列设计和递送载体的选择。RNA分子易受核糖核酸酶（RNases）降解，因此在转染前通常需要被包裹在转染试剂中。**脂质纳米颗粒（LNPs）**因其在体内和体外应用中的有效性和安全性，成为最有效的递送方法之一。

2. 材料与方法

研究使用了NeoLNPTM RNA转染试剂，该试剂利用LNPs进行RNA的有效包裹和递送。LNPs的典型组成包括四种主要成分：可离子化脂质、辅助脂质、聚乙二醇化脂质和胆固醇。这些成分的比例约为50:10:1.5:38.5。可离子化脂质在生理pH下呈中性，但在酸性环境中（如内体）变为带正电荷，有助于RNA的包裹和内体逃逸。辅助脂质提供结构完整性和稳定性，聚乙二醇化脂质延长LNPs在血液中的循环时间，胆固醇增强脂质双层的流动性和机械强度。

3. 实验设计与结果

研究系统地评估了影响转染效率的多个参数，包括RNA浓度、RNA/LNP体积比、混合技术、LNP稳定性和培养基。结果表明，转染效率的最佳RNA浓度约为40-60 ng/µL，RNA与LNP的比例为1:0.75-1:1时蛋白表达最高。温和的混合技术优于较强烈的方法，LNP-RNA复合物的稳定性显著影响转染结果。

3.1 RNA浓度的影响

实验表明，随着RNA浓度的增加，转染效率呈现上升趋势，直到60 ng/µL达到峰值。此后，尽管在100 ng/µL时表达略有下降，但整体趋势显示RNA浓度对转染效率的关键作用。

3.2 RNA/LNP体积比的影响

不同的RNA与LNP比例对转染效率有显著影响。最佳比例为1:0.75，超过此比例会导致转染效率下降，表明过量的LNP可能阻碍转染效率。

3.3 混合技术的影响

研究比较了不同的混合方法，发现重复移液的效果最好，尽管与其他方法的差异不显著。低标准偏差表明结果的一致性，暗示移液可能促进更有效的mRNA和LNP混合。

4. 讨论与结论

研究结果为提高RNA转染效率提供了实用指南，强调了优化RNA浓度和RNA/LNP比例的重要性。研究还指出，温和的混合技术和LNP的稳定性是影响转染效率的关键因素。这些发现为RNA治疗的更有效应用铺平了道路。

术语解释

• 转染（Transfection）：将外源核酸引入细胞的过程。
• 脂质纳米颗粒（LNPs）：用于递送核酸的纳米级脂质载体。
• 可离子化脂质：在不同pH环境下改变电荷状态的脂质，有助于核酸的包裹和释放。
• 聚乙二醇化脂质：通过聚乙二醇链减少免疫系统识别，延长LNPs的循环时间。

这篇论文通过详细的实验设计和结果分析，为RNA递送的优化提供了重要的见解，特别是在RNA为基础的治疗方法日益重要的背景下。